在冷凍電鏡技術(shù)中，樣品冷凍質(zhì)量直接決定最終成像分辨率。投入冷凍法（Plunge Freezing）作為很常用的冷凍固定技術(shù)，以其操作簡便、成本低廉的優(yōu)勢，成為單顆粒分析的方法。

投入冷凍技術(shù)原理

投入冷凍技術(shù)通過將樣品載網(wǎng)直接投入-196℃的液態(tài)乙烷/丙烷中，實(shí)現(xiàn)超高速冷卻，使樣品中的水形成非晶態(tài)冰（玻璃態(tài)冰）而非破壞性的六方晶冰。

關(guān)鍵步驟：

• 樣品應(yīng)用：將3-5μL樣品滴在電鏡載網(wǎng)上

• 濾紙吸樣：用濾紙從邊緣吸除多余液體，形成薄液膜

• 快速投入：機(jī)械臂快速將載網(wǎng)投入液態(tài)乙烷中

• 液氮保存：將冷凍后的樣品轉(zhuǎn)移至液氮中存儲

技術(shù)優(yōu)缺點(diǎn)分析

優(yōu)勢：

• 操作簡單快速，單個(gè)樣品僅需幾分鐘

• 成本低廉，無需復(fù)雜設(shè)備

• 能夠保存表面納米結(jié)構(gòu)

• 適合大批量樣品的快速制備

局限性：

• 僅能處理＜200nm超薄層樣品

• 厚樣品內(nèi)部易形成冰晶

• 需要優(yōu)化樣品濃度和緩沖條件

• 對樣品均勻性要求較高

  
  

適用樣品類型

投入冷凍技術(shù)特別適合以下樣品：

• 病毒顆粒（流感病毒、新冠病毒等）

• 蛋白質(zhì)溶液（膜蛋白、復(fù)合體等）

• 脂質(zhì)體及納米顆粒

• 核糖體及其他大分子復(fù)合物

• 單層細(xì)胞及細(xì)胞器懸液

手動 vs. 自動投入冷凍對比表

Leica EM GP2自動投入冷凍儀：

精準(zhǔn)控制的冷凍專家

全自動機(jī)械控制和環(huán)境參數(shù)可編程設(shè)計(jì)，有效解決手動操作的不確定性問題。其內(nèi)置的溫濕度控制艙（4-60℃, 濕度最高99%）能有效防止樣品溶液揮發(fā)，確保實(shí)驗(yàn)條件的高度重復(fù)性。

Leica EM GP2 可調(diào)整二次冷凍劑溫度，在實(shí)現(xiàn)快速液化的同時(shí)，可定義不同的冷凍溫度，獲得更佳的冷凍結(jié)果。

應(yīng)用案例展示

病毒顆粒

微管

細(xì)菌

細(xì)胞

核心功能：

• 環(huán)境參數(shù)可調(diào)：溫度（4-60℃）和濕度（最高99%）精確控制

• 過程全自動：從吸濾到投入全程程序化操作

• 冷凍劑溫度可調(diào)：快速液化，且可實(shí)現(xiàn)特定溫度冷凍

• 高重現(xiàn)性：確保每個(gè)樣品獲得一致的冷凍條件

• 防污染設(shè)計(jì)：封閉式工作艙避免環(huán)境污染

• 用戶友好：觸摸屏控制，操作簡單易學(xué)

該儀器特別適合病毒學(xué)研究和蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)分析，能夠大幅提高樣品制備成功率和數(shù)據(jù)質(zhì)量，是單顆粒分析研究的理想選擇。

選擇正確的冷凍方法，

讓您的電鏡研究事半功倍！

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